兔B細(xì)胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)ELISA檢測(cè)試劑盒組成及試劑配制：標(biāo)準(zhǔn)品（S0-S5）濃度依次為：0、10、20、40、80、160 pg/mL

1. 酶標(biāo)板（Microelisa stripplate）：一塊（96孔或者48孔）

2. 標(biāo)準(zhǔn)品（Standard）：0.3ml*6管或者0.3ml*6管

3. 稀釋液（Sample Diluent）：6ml或者3ml

4. 檢測(cè)抗體-HRP（HRP-Conjugate reagent）：10ml或者5ml

5. 20x洗滌緩沖液（20X Wash solution）：25ml或者15ml（按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋）

6. 底物A（Chromogen Solution A）：6ml或者3ml

7. 底物B（Chromogen Solution B）：6ml或者3ml

8. 終止液（Stop Solution）：6ml或者3ml

9. 封板膜（Closure plate membrane）：2張

10. 說(shuō)明書(shū)（User manual）：1份

11. 自封袋（Sealed bags）：1個(gè)

試劑的準(zhǔn)備：20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

洗板方法：

1.  手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。

2.  自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

操作步驟：

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；

3.  樣本孔先加待測(cè)樣本10μL，再加稀釋液40μL；空白孔不加。

4.  除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

兔B細(xì)胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)ELISA檢測(cè)試劑盒常見(jiàn)問(wèn)題：

1.     使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細(xì)胞提取液可能會(huì)由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差。

2.     若樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清，因該類樣本干擾素較多，如：細(xì)胞狀態(tài)、細(xì)胞數(shù)量、采樣時(shí)間等，所以可能存在檢測(cè)不出的情況。

3.     某些天然蛋白或重組蛋白，包括原核及真核重組蛋白，可能因?yàn)榕c本產(chǎn)品所使用的檢測(cè)抗體及捕獲抗體不匹配，而不被檢測(cè)出。

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