檢測原理：試劑盒采用雙抗原一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被人抗AECA抗原的包被微孔中，依次加入標本、HRP標記的檢測抗原，經過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD 值），與CUTOFF值相比較，從而判定標本中人抗內皮細胞抗體（AECA）的存在與否。

人抗內皮細胞抗體(AECA)ELISA檢測試劑盒性能：

1.  準確性：陽性對照孔OD值平均值≥1.00；陰性對照孔OD值平均值≤0.15，說明試驗結果有效。

2.  特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。

3.  重復性：板內、板間變異系數(shù)均小于15%。

結果判斷：

 1.  試驗有效性：陽性對照孔OD值平均值≥1.00；

                陰性對照孔OD值平均值≤0.15。

2.  臨界值（Cut off）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

3.  陰性判斷：樣品OD值＜臨界值（Cut off），樣品為陰性

4.  陽性判斷：樣品OD值＞臨界值（Cut off），樣品為陽性

人抗內皮細胞抗體(AECA)ELISA檢測試劑盒操作注意事項：

1.  試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結晶溶解后再使用。

2.  實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

3.  預處理后的樣本無需稀釋，直接取50μL加樣即可。

4.  嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。

5.  所有液體組分使用前充分搖勻。

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